يرجى تقديم النص الإنجليزي الذي ترغب في ترجمته إلى العربية. لم يتم إدراج أي نص مصدر في رسالتك.

نظرًا لمبدأ الاختبار، يتطلب اختبار G-test أنابيب جمع دم بمستوى عالٍ من الجودة، بحيث لا تكون معقمة فحسب، بل تكون خالية أيضًا من البيروجينات والإنزيمات.

أسباب فشل أنابيب جمع الدم

(1) التلوث البكتيري أو الفطري أو وجود البايروجينات (أي السموم الداخلية)؛

(2) التداخل الناتج عن بعض الأيونات أو المكونات الأخرى لمادة التخثر الأولية.

الوقت الأمثل من جمع العينة إلى إجراء الاختبار لا يتجاوز ساعتين، ويمكن تخزين العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 6 ساعات بعد فصل المصل.

يجب حفظ عينات المصل مبردة عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن 24 ساعة. أما التخزين طويل الأمد فيجب أن يكون عند درجة حرارة أقل من -20 درجة مئوية، ويفضل أن تكون -70 درجة مئوية. تجنّب تكرار تجميد العينات وإذابتها. يُشترط النقل المبرد. بالنسبة للمستخدمين الذين يجرون جلسة إلى جلستين أسبوعيًا، يجب نقل عينات المصل إلى قوارير نقل خالية من البيروجينات أو أنابيب EP خالية من البيروجينات للتخزين. لا يجوز تخزين العينات التي لم يتم طردها بالطرد المركزي. يجب عدم تكرار تجميد المصل وإذابته، لأن ذلك سيغير من مادة المصل، خاصة البروتينات، ويؤثر على نتائج الاختبار.

مكونات عدة اختبار G، بعد فتحها وإذابتها في درجة حرارة الغرفة، يجب وضع ملصق على الكمية الزائدة من العامل الرئيسي وتجميدها في الوقت المناسب، ثم استخدام العامل الرئيسي غير المجمد خلال 15 دقيقة؛ ويجب ألا تُترك المنتجات القياسية ومنتجات مراقبة الجودة لأكثر من ساعة واحدة بعد إعادة الإذابة. (من الناحية العملية، تبيّن أنه كلما قصرت مدة ترك العامل الرئيسي في درجة حرارة الغرفة، كان ذلك أكثر ملاءمة لاستقرار حفظه.)

إذا كانت قيم المعدل للعينة القياسية ومراقبة الجودة والعينة منخفضة جميعها، فقد يكون السبب تعطل الكاشف الرئيسي أو انخفاض درجة حرارة الواسم الإنزيمي؛ أما إذا كانت قيم المعدل منخفضة لمراقبة الجودة والعينة فقط، فقد يكون السبب عدم تجانس خلط محلول المعالجة. تتطلب التعليمات الواردة في اختبار G الرج لمدة دقيقة واحدة، وينبغي خلط مراقبة الجودة والعينة القياسية ومحلول المعالجة بشكل كامل وفقاً للتعليمات بدقة.

(1) تلوث العامل الرئيسي؛

(2) فشل العامل الرئيسي (حالة الفشل غير الكامل)، والذي قد يحدث بسبب عدم كفاية درجة حرارة التجميد.

(3) بعد إضافة العامل الرئيسي، إذا لم يتم وضع الصفيحة في جهاز قياس الإنزيمات (الإنزيم ماركر) لإجراء الاختبار في الوقت المناسب، فيجب تحديد البرنامج واسترجاع الصفيحة قبل إضافة العامل الرئيسي بحيث يمكن إجراء الاختبار في أقرب وقت ممكن؛

(4) بعد إضافة العامل الرئيسي، تُوضع الصفيحة في جهاز الزيموغراف، ولكن لا يمكن بدء التشغيل فورًا لأن درجة حرارة الجهاز لم ترتفع بعد إلى الدرجة المطلوبة. وفي هذه الحالة، يجب مراقبة درجة الحرارة مسبقًا للتأكد من أنها تلبي المتطلبات، وإذا لم تكن كذلك، فيجب رفع درجة الحرارة المضبوطة، ثم إعادة ضبطها إلى 37 درجة بعد بلوغها، ثم النقر على "بدء" مباشرة بدلاً من النقر على إدخال الصفيحة عند بدء الكشف (أو الحضانة).

(1) لا يُسمح للماصة بتعبئة حجم العينة المطلوب.

الحل: قم بمعايرة الماصة بانتظام وأعد العملية باستخدام ماصة أخرى.

(2) الطرف المستخدم ليس خالياً من البيروجينات.

الحل: استخدم طرفاً غير حراري لإعادة المهمة.

(3) الطرف غير مُحكم التثبيت أو به تسريب؛ وبالتالي لا يُسمح بعمليتي الشفط والإضافة.

الحل: استخدم رأس ماصة أصلي سليم غير حراري لإعادة التحقق، مع الانتباه إلى مستوى السائل في رأس الماصة لتجنب استخدام رأس الماصة الذي به مشكلة لإضافة العينات مرة أخرى.

(1) ما إذا كانت العينة تعاني من مشكلة انحلال الدم أو اليرقان أو شحوم الدم.

(2) مرة أخرى، من الضروري ملاحظة ما إذا كانت خطية دفعة الاختبارات والقيمة المقاسة لمنتج مراقبة الجودة تفي بمتطلبات المجموعة، وما إذا كانت قيمة متوسط المعدل المقابلة لقيمة تركيز كل منتج قياسي في تحضير المنحنى القياسي تمثل علاقة تتراوح بين 1.5 إلى 2 ضعف بين a و b و c و d و e.

(3) إذا كان المستخدم يقوم بمراقبة الجودة الداخلية، فمن الضروري أيضًا التحقق مما إذا كانت نتائج مراقبة الجودة لهذا اليوم خارجة عن السيطرة. وإذا كانت خارجة عن السيطرة، فيجب التعامل معها وفقًا لإجراءات معالجة حالات الخروج عن السيطرة.

(4) أولاً، استبعاد وجود العوامل التي تسبب نتائج إيجابية كاذبة أو سلبية كاذبة.

(5) فهم الخلفية السريرية لعملية أخذ العينة من المريض، مثل مدة المرض، وما إذا كان المريض يخضع للعلاج بالأدوية المضادة للفطريات.

(6) ما إذا كانت درجة حرارة الجهاز، ودقة إضافة العينة، وخلط المواد القياسية متجانسة بشكل كافٍ.

(7) التواصل مع الموظفين الفنيين لدى الشركة المصنعة لمعرفة ما إذا كان السبب يعود إلى مجموعة الكواشف.

(1) اختيار منتج جيد والقيام بالتحقق من الأداء أو المقارنة قبل الاستخدام؛

(2) التشغيل بدقة وفقًا لإجراءات التشغيل القياسية (SOP) المحددة في التعليمات؛

(3) اتباع التعليمات بدقة لضمان أن الاختبار يلبي معايير الجودة؛

(4) إنشاء نظام مراقبة جودة داخلي وإجراء مقارنة بين المختبرات عند توفرها؛

(5) استبعاد عوامل النتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة الواضحة.

(6) استخدام أنابيب جمع الدم المفرغة من الهواء التي تم التحقق منها وتأهيلها من قبل الشركات المصنعة لضمان الحصول على عينات مؤهلة.

(7) الاختبار المتسلسل، حيث تُعد النتائج الإيجابية المتسلسلة مؤشرًا قويًا على الإصابة بالعدوى الفطرية؛

(8) لا يمكن استخدام ظهور أو اختفاء G كمؤشر لبدء أو إيقاف استخدام الأدوية المضادة للفطريات.

(9) يجب تحليلها بالاقتران مع الاختبارات السريرية والزرعية والمرضية وغيرها من الاختبارات المصلية مثل اختبار GM واختبار MN؛

(10) التواصل الوثيق مع العيادة.

(1) جهاز قياس الإنزيم (قارئ ELISA): يجب أن يكون قادرًا على استخدام طول موجة 450 نانومتر للكشف (يُفضَّل الطول الموجي المزدوج 450 نانومتر و620 نانومتر أو 630 نانومتر).

(2) طرد مركزي عالي السرعة: يجب أن يكون قادرًا على الوصول إلى قوة طرد مركزي تبلغ 10,000 جم أو أكثر، ويُفضَّل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

(3) حاضنة درجة حرارة ثابتة 37℃ (أو أي بديل آخر مثل حمام هوائي ثابت درجة الحرارة): يجب أن يكون من الممكن ضبط درجة الحرارة على 37℃.

(4) معدات الغليان: يُنصح باستخدام حمام معدني أو فرن حثّي تم التحقق من مطابقته من قبل الشركة.

(5) خلاط دوّار (Vortex mixer).

(6) ماصة متعددة القنوات سعة 300 ميكرولتر (صف من الماصات) والأطراف المناسبة لها: تساعد على تقليل الفروق الزمنية عند إضافة العينات إلى الآبار المختلفة.

(7) ماصات أحادية القناة سعة 100 ميكرولتر و1000 ميكرولتر مع الأطراف المناسبة لها.

(8) أسطوانة مدرجة لتحضير محلول الغسيل وزجاجة كاشف لحفظ محلول الغسيل.

(9) غشاء ختم الصفائح: يجب على المستخدمين تجهيز كمية احتياطية منه وفقًا لعدد التجارب التي تُجرى مع كل علبة كواشف.

(10) أنبوب طرد مركزي: سعة 1.5 مل.

معظم الغسولات المركزة المستخدمة في اختبار المقايسة المناعية الإنزيمية هي عازل فوسفاتي، ولكن نظرًا لاختلاف قيم التركيز بين الكواشف، يُمنع منعًا باتًا خلط كواشف من مصنّعين أو مشاريع مختلفة. ومع ذلك، يمكن استخدام غسيل Dynamiker's المركّز للمستضد والجسم المضاد في الخلط.

نظرًا لصعوبة سحب الدم لدى الأطفال، إذا كانت عينة المصل غير كافية في حالة المعالجة المسبقة، يمكن معالجتها وفقًا لـ 180 ميكرولتر من المصل + 60 ميكرولتر من محلول المعالجة، أما إذا كان المصل كافيًا فيجب معالجته بدقة وفقًا لـ 300 ميكرولتر من المصل + 100 ميكرولتر من محلول المعالجة.

(1) استخدام العوامات سهلة التشوه، مثل الإسفنج، يؤدي إلى تشوه العوامات في الحمام المائي، مما ينتج عنه معالجة أولية غير كافية. يجب معالجة العينة في حمام مائي يغلي تماماً؛

(2) عدم شفط المادة الطافية فوراً بعد المعالجة يؤدي إلى امتصاص المادة الطافية بواسطة الراسب. يجب شفط المادة الطافية على الفور؛

(3) تعرض بعض أجهزة الطرد المركزي 10,000 g، لكن قوة الطرد المركزي الفعلية قد لا تصل إلى 10,000. يجب تمديد مدة الطرد المركزي أو زيادة قوة الطرد المركزي؛

(4) عند معالجة العينات الفردية، قد يحدث التصاق وانفصال طبقي على الجدار، وقد تكون كمية المادة الطافية كافية للاختبار، لذلك يجب توخي الحذر عند شفط العينات لتجنب شفط الراسب. يمكن أن تؤدي زيادة مدة الطرد المركزي إلى حل هذه المشكلة وزيادة المادة الطافية للعينة أيضاً. يمكنك أيضاً هرس الراسب بطرف الماصة وإعادة الطرد المركزي للحصول على كمية كافية من المادة الطافية.

(1) إضافة غير دقيقة للسائل، تأكد من أن كمية السائل المضافة دقيقة؛

(2) أثناء عملية غسل الصفيحة، تكون عملية قلب الصفيحة غير موحدة، مما يسبب تلوثًا بسبب الصدمة، قم بتصحيح العملية؛

(3) ترك الصفيحة المعلمة بالإنزيم في درجة حرارة الغرفة لفترة طويلة يؤدي إلى فشلها، حاول تقصير مدة وضعها في درجة حرارة الغرفة؛

(4) بعد إضافة الجسم المضاد الأولي أو محلول الإنهاء، تكون مدة رج الصفيحة قصيرة جدًا أو بدون رج، مما يؤدي إلى عدم اختلاط كامل، يجب تمديدها بشكل مناسب؛

(5) عند إضافة العينات، أخذ زجاجة كاشف خاطئة وإضافة كاشف خاطئ، يجب فحص ملصق الكاشف بعناية؛

(6) عدم تنفيذ وقت الحضانة كما هو مطلوب؛

(7) انسكاب السائل أثناء العملية، مع تغير واضح في الحجم أو تسبب تلوث بين الآبار؛

(8) عملية الغسيل لا يتم فيها تجفيف الصفيحة بالنقر (التنشيف)، ويوجد بقايا سائل في الآبار.

تشير الأدبيات الأجنبية إلى أنه يمكن اكتشاف داء الرشاشيات الغازي (IA) قبل الأعراض السريرية بمتوسط 5-8 أيام، وقبل التصوير المقطعي عالي الدقة بمتوسط 7.2 يوم، وقبل بدء العلاج المضاد للفطريات التجريبي بمتوسط 12.5 يوم

تفسير هذه الظاهرة هو أن العدلات قادرة على بلعمة الميسيليوم وقتله بسرعة، مما يقلل العبء الفطري في الجسم وبالتالي يقلل كمية GM المنطلقة إلى مجرى الدم. كما توجد مستقبلات المانوز على سطح الخلايا المحببة، والتي يمكنها الارتباط بـ GM، وكلاهما يؤدي إلى نتيجة سلبية كاذبة في اختبار GM.

أظهرت جميع الدراسات أن اختبار GM يتمتع بخصوصية عالية، بينما تتقلب الحساسية (29%-100%). ويشير Mennink-Kersten وآخرون [25] إلى أن هناك عدة أسباب لذلك.

(1) يرتبط نمو الرشاشيات وإطلاق المستضد بالظروف الغذائية ودرجة الحموضة (pH) للبيئة المحيطة. فإذا كانت التغذية كافية وكانت درجة الحموضة عند 7.5، يمكن للفطر أن يحافظ على نموه ويطلق GM، ولكن عندما يتطور الالتهاب، يُثبط نمو الفطر وينخفض إطلاق GM.

(2) يتعلق هذا بالتعرض للمحددات المستضدية المرتبطة بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة: ما إذا كان الجسم المضاد وحيد النسيلة EB-A2 يتعرف على المحددات المستضدية السطحية ويرتبط بها هو عامل مهم يؤثر على حساسية الطريقة. أسفر اختبار ELISA لسائل الغسيل القصبي السنخي لدى مريض تم تأكيد إصابته بعدوى الرشاشيات عن نتيجة إيجابية. ومع ذلك، أسفرت الاختبارات التسلسلية لمستضدات المصل عن نتائج سلبية. وخلص الباحثون إلى أن مستضد الفورانوجالاكتان كان موجودًا بالتأكيد في الدم ولم يتم اكتشافه لأن مستضد GM يرتبط بشيء في الدم يحجب المحددات المستضدية التي ترتبط بالجسم المضاد وحيد النسيلة EB-A2.

(3) العلاج المضاد للفطريات لدى المضيف: ما إذا كان العلاج المضاد للفطريات يُجرى قبل الاختبار هو عامل مهم يرتبط بحساسية التجربة. قام Marr وآخرون [26] بتحليل 986 عينة مصل من 67 مريضًا ووجدوا أن حساسية طريقة EI ISA لدى المرضى الذين لم يتلقوا علاجًا مضادًا للفطريات يمكن أن تصل إلى 80%، بينما كانت الحساسية لدى المرضى الذين تلقوا علاجًا مضادًا للفطريات 20% فقط. لذلك، تقترح المادة 10 من إرشادات IDSA لعام 2016 لتشخيص وعلاج داء الرشاشيات [27] عدم التوصية بالفحص الروتيني للدم بحثًا عن GM في المرضى الذين يتلقون علاجًا مضادًا للفطريات أو علاجًا وقائيًا، ولكن يمكن اختبار عينات تنظير القصبات من هؤلاء المرضى بحثًا عن GM (موصى به بشدة؛ مستوى عالٍ من الأدلة).

نعم، بعد الحضانة خارج الجهاز في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة، اضغط على الاختبار السريع، واقرأ النتيجة خلال حوالي 10 ثوانٍ، ويمكنك إجراء عدة اختبارات على التوالي.

يمكن وضع اختبار واحد فقط في الاختبار القياسي في كل مرة، لذلك يُنصح أكثر بتحضينه خارج الجهاز وإجراء الاختبار السريع، حيث أن الاختبار القياسي معرض للتلوث بسهولة.

إذا اخترت الطرد المركزي المسخّن، فستحتاج إلى أنابيب EP، وأجهزة طرد مركزي، وحمامات مائية أو حمامات معدنية، وغيرها من المواد الاستهلاكية.

سيكون هناك بعض التأثير، لذلك تحتاج إلى ضمان التحكم في درجة الحرارة والرطوبة في المختبر لضمان دقة النتائج. لا يمكن ضمان حساسية الاختبار عندما تكون درجة الحرارة المحيطة أقل من 10 درجات مئوية أو أعلى من 40 درجة مئوية والرطوبة النسبية أعلى من 80%.

1. المعالجة المسبقة: المعالجة المسبقة غير كافية

2. وقت الحضانة: وقت الحضانة طويل جدًا، مما يؤدي إلى إضعاف إشارة التألق للمجموعة المرتبطة، مما يؤدي إلى انخفاض البيانات عند أخذ القراءات، وينتج عنه نتائج سلبية كاذبة.

3. درجة حرارة الحضانة: تؤثر درجة حرارة الحضانة على كفاءة الارتباط.

4. الحجم الزائد للإضافة قد يؤدي إلى ارتداد العينة، مما يؤدي إلى نتائج غير طبيعية مثل النتائج الإيجابية الكاذبة.

قد يكون هناك سببان. الأول: أن اختبار G يسبق عمومًا نتيجة اختبار GM الإيجابية، وقد تكون هناك نافذة زمنية للكشف؛ والثاني: أن تركيز GM في الجسم يرتفع لفترة قصيرة من الوقت، وقد يكون بعض هذا الارتفاع عابرًا، وقد يفوت وقت الكشف أو تكون قيمة GM منخفضة (أقل من حد الكشف الخاص بالكاشف). لذلك، يُنصح بإجراء اختبارات ديناميكية للفئات عالية الخطورة، مرتين أسبوعيًا، وذلك لزيادة معدل الاكتشاف الإيجابي.

أظهرت الأبحاث الأساسية أن الرشاشية (Aspergillus) تغزو بشكل رئيسي جدار الأوعية الدموية، وعلى طول جدار الوعاء، ولا توجد أساساً في الدم، لذلك تكون مزرعة الدم سلبية. ظهور النتيجة الإيجابية ناتج عن التلوث. ومع ذلك، لدى الخبراء آراء مختلفة حول وجهة النظر هذه، لأن بعض المختبرات تزرع بالفعل الرشاشية من دم مرضى IA. لذلك، أعتقد شخصياً أن مفتاح نتيجة مزرعة الدم الإيجابية للرشاشية يجب أن يُربط بالحالة السريرية، ومن ثم تحديد ما إذا كانت النتيجة تلوثاً أم ذات معنى.

يقارن الجدول 4 الأنواع الفطرية التي يكشفها اختبار G واختبار GM على التوالي. يُعطي اختبار G نتائج إيجابية لجميع الأمراض الفطرية باستثناء المستخفيات والفطريات الرمية (بما في ذلك ترايكوديرما وريزوكتونيا وغيرها)، بينما يختص اختبار GM بالرشاشيات. ومع ذلك، يمكن أن يتفاعل البنسيليوم بشكل متصالب مع الأجسام المضادة لـ GM، مما يؤدي إلى نتيجة إيجابية كاذبة في اختبار GM، والوضع مشابه لبعض أنواع المستخفيات.

إذا كانت نتيجة اختبار G إيجابية ونتيجة اختبار GM سلبية، فمن المحتمل أن:

(1) هناك عدوى فطرية غير الرشاشيات، مثل المبيضات.

(2) وجود عامل يسبب نتيجة إيجابية كاذبة في اختبار G لدى مريض لا يعاني من عدوى فطرية.

إذا كانت نتيجة اختبار G سلبية ونتيجة اختبار GM إيجابية، فمن المحتمل أن:

(1) المرضى الذين يعانون من نقص المحببات، أو المرضى الذين لديهم خلل في وظيفة البلعمة لدى الخلايا المحببة، غير قادرين على إطلاق 1،3-بيتا-د-جلوكان من الفطريات.

(2) في المرحلة المبكرة من العدوى، يكون نمو وإفراز الرشاشيات أقوى من موت وهضم وتفكك الرشاشيات، والمادة 1،3-بيتا-د-جلوكان التي يكشفها اختبار G لا تصل إلى المستوى الإيجابي.

غالبًا ما يرتبط داء الفطريات الغازية (IFD) بالاستخدام طويل الأمد للمضادات الحيوية واسعة الطيف؛ ولهذا السبب، غالبًا ما تتعايش العدوى الفطرية الغازية مع العدوى البكتيرية الشديدة. ويعتمد ما إذا كانت نتيجة اختبار G أو اختبار GM إيجابية حقيقية (أي أن المريض يعاني بالفعل من داء فطري غازي مصاحب) أو إيجابية كاذبة (أي أن المريض يعاني من عدوى بكتيرية فقط، وليس داءً فطريًا غازيًا) على تحليل سريري شامل. فعلى سبيل المثال: هل يعاني المريض من نقص المحببات (العدلات)؟ هل فشل استخدام المضادات الحيوية واسعة الطيف؟ هل ظهرت آفات جديدة في التصوير المقطعي عالي الدقة للصدر فوق الآفة الأصلية؟ هل تتميز الآفات بملامح الالتهاب الرئوي الدوالي (مثل علامة الهالة، وعلامة الهلال الهوائي، والتكهف، وما إلى ذلك)؟ وهل كانت مزارع الدم وغيرها من المواقع المعقمة إيجابية للمزارع الفطرية، أم أظهر الفحص المجهري المباشر نتائج تدل على وجود العفن؟

باختصار، التقييم السريري هو الحَكَم النهائي لنتائج اختبار G واختبار GM، كما أن الفحوصات المخبرية الأخرى للفطريات (الفحص المجهري، المزارع الفطرية، وتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل PCR) لها أيضًا قيمة مرجعية بالغة الأهمية.

(1) إذا كانت نتيجة اختبار G إيجابية ونتيجة اختبار Mn سلبية:

أ. اختبار G هو اختبار شامل للفطريات (pan-fungal test)، يمكنه الكشف عن العدوى الفطرية الغازية بخلاف المستخفية (Cryptococcus) والتريكوديرما (Trichoderma)، فإذا كانت نتيجة G إيجابية وMn سلبية، فقد يكون السبب عدوى فطرية أخرى، مثل الرشاشيات الدخنية (Aspergillus fumigatus).

ب. إن Mn (مانان المبيضات) هو مكوّن بنيوي لجدار خلية المبيضات، لكن مستضده غير مستقر حرارياً وسهل التحلل.

(2) إذا كانت نتيجة اختبار G سلبية ونتيجة اختبار Mn إيجابية:

أ. الاختلافات في وقت إطلاق المؤشرات وكمية إطلاقها:

أولاً، قد تكون هذه الظاهرة غير المتطابقة مرتبطة بوقت إطلاق وكمية إطلاق المؤشرات المختلفة، فعلى سبيل المثال، لا يتوزع الجلوكان (1-3)-β-D على سطح الفطر، ولا يمكن إطلاقه إلا من خلال البلعمة ومعالجته بواسطة الخلايا البلعمية؛

ب. وجود عوامل تداخل تؤثر على الاختبار:

قد يكون هذا نتيجة سلبية كاذبة في اختبار G أو نتيجة إيجابية كاذبة في اختبار Mn. على سبيل المثال، تناول دواء الأسيكلوفير المضاد للفيروسات يمكن أن يسبب نتيجة إيجابية كاذبة في اختبار Mn ونتيجة سلبية في اختبار G.